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欢迎定制 |可定量的单碱基分辨率m6A甲基化图谱

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在研究m6A时,m6A RNA免疫沉淀测序(m6A-RIP-seq)是最常用的m6A测序方法,但其分辨率较差(~150nt)。单碱基分辨率的m6A测序技术已经被开发,但之前技术主要利用交联和免疫沉淀m6A特异性抗体,进行反转录并在m6A位点诱导截断或突变。涉及的过程较繁琐,如放射性凝胶电泳。此外,没有对照以纠正抗体免疫沉淀的效率或标准化。为克服之前方法的技术局限性,新的m6A测序方法已被开发。

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在170多种已知的RNA修饰中,N6-methyladenosine(m6A)是最丰富的mRNA修饰,其调节多种转录后过程,如mRNA降解、mRNA翻译、pre-mRNA剪切和pri-miRNA加工等。另一个突出的RNA修饰是N6,2′-O-dimethyladenosine(m6Am),其位于mRNA的第一个核苷酸处,与mRNA 帽相邻的2’-O-甲基腺苷的碱基甲基化形成(图1),m6Am能够抵抗DCP2介导的mRNA降解以稳定mRNA。

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