制备用于smallRNA分析的RNA过滤库
small RNA测序之后,会得到很多不同类型的小RNA数据,其中包括我们常常并不感兴趣的RNA类型,比如rRNA区间产生的小RNA。
有必要准备一个数据库,用于过滤掉这部分小RNA。
做转录组分析时,我们用的一般是sillva库,因为主要是rRNA过滤。
而小RNA数据分析,则不一样,除了rRNA,还有snoRNA,tRNA等。
此时,rfam数据库可能是一个不错的选择。
以下,是一年多以前的一个记录。
操作流程
# 准备一个Rfam库,仅不包含miRNA
#
mkdir Rfam
cd Rfam/
#
wget ftp://ftp.ebi.ac.uk/pub/databases/Rfam/12.1/fasta_files/*
# 下载下来的是所有Rfam上的序列数据
# 下面要做分类
# 直接在浏览器下复制对应 归类 样本
http://rfam.xfam.org/families
# 保存在文件 Rfam_classification.xls
cut -f3 Rfam_classification.xls |sort|uniq -c
243 Cis-reg;
28 Cis-reg; frameshift_element;
30 Cis-reg; IRES;
15 Cis-reg; leader;
26 Cis-reg; riboswitch;
9 Cis-reg; thermoregulator;
79 Gene;
27 Gene; antisense;
11 Gene; antitoxin;
64 Gene; CRISPR;
217 Gene; lncRNA;
530 Gene; miRNA;
19 Gene; ribozyme;
15 Gene; rRNA;
3 Gene; snRNA;
463 Gene; snRNA; snoRNA; CD-box;
266 Gene; snRNA; snoRNA; HACA-box;
18 Gene; snRNA; snoRNA; scaRNA;
15 Gene; snRNA; splicing;
384 Gene; sRNA;
2 Gene; tRNA;
9 Intron;
# miRNA
perl -F'\t' -lane 'print $F[1] unless $F[2]=~/Gene; miRNA;/' Rfam_classification.xls > Rfam_withoutMIR.ids
#
for ID in `cat Rfam_withoutMIR.ids`;do zcat Rfam/$ID.fa.gz;done > Rfam_withoutMIR.fa
#
bowtie-build Rfam_withoutMIR.fa bowtie-index/Rfam_withoutMIR
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